PCR儀的使用方法

更新時(shí)間：2021-02-05

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方法：

1、將DNA加熱（至90~95℃）變性，bai 將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板。

2、則是令 Primers于一定的溫度下（冷卻至55~60℃）附著于模板DNA兩端。后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下（加熱至70~75℃）進(jìn)行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。

標(biāo)準(zhǔn)PCR儀也叫做終點(diǎn)PCR儀，是指目的基因僅經(jīng)過預(yù)變性、變性、退火、延伸階段產(chǎn)生大量的核酸序列的PCR儀，PE-Cetus公司推出的一臺(tái)PCR自動(dòng)化熱循環(huán)儀屬于此種。

根據(jù)PCR退火溫度和擴(kuò)增條件（細(xì)胞內(nèi)/外），標(biāo)準(zhǔn)PCR又可以分為三類：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。

PCR是分子生物學(xué)研究極其重要的工具，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA段的分子生物學(xué)技術(shù)，基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件，使目的DNA在細(xì)胞外完成擴(kuò)增的過程，它可被看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。

擴(kuò)展資料

1、普通PCR儀：一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡單的、對(duì)單一退火溫度的目的基因的擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。

2、梯度PCR儀：普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置，一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)。由于被擴(kuò)增的DNA段不同，其退火溫度也不同，通過梯度設(shè)置。

可一次性篩選出的退火溫度。這樣既可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率，又能節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。

3、原位PCR儀：是將PCR技術(shù)的高效擴(kuò)增與原位雜交的細(xì)胞定位結(jié)合起來，用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀，從而在組織細(xì)胞原位檢測(cè)單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技術(shù)的待檢標(biāo)本一般先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。

細(xì)胞膜和核膜均具有一定的通透性，當(dāng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，各種成分，如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可進(jìn)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)，以固定在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)的RNA或DNA為模板，于原位進(jìn)行擴(kuò)增。

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